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Cmctag Alapca 納米抗體試劑

簡要描述：Cmctag Alapca 納米抗體試劑 CMCTAG于20012年在威斯康星州密爾沃基成立，是免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)試劑的。CMCTAG提供世界上抗體選擇之一，以及用于生命科學(xué)研究和診斷的原代細(xì)胞。 Cmctag銷售 Cmctag產(chǎn)品供應(yīng) GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊駝納米抗體偶聯(lián)磁珠

產(chǎn)品型號：AT1773
廠商性質(zhì)：代理商
更新時間：2023-06-09
訪問量：1259

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Cmctag Alapca 納米抗體試劑

GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 羊駝納米抗體偶聯(lián)磁珠目錄號：AT1773

規(guī)格：5 mL（200 次反應(yīng)）
濃度：10 mg/ml

由于檢測細(xì)胞內(nèi)維多利亞水母綠色熒光蛋白 (GFP) 僅需要紫外線或藍(lán)光照射，因此它為監(jiān)測活細(xì)胞中的基因表達(dá)和蛋白質(zhì)定位提供了好的手段。

抗 GFP 磁珠是一種羊駝單域抗體，通過酰肼鍵共價連接到磁珠上。該抗體在融合蛋白的 N 端、C 端和內(nèi)部位置結(jié)合 GFP。

描述
GFP-Catch-Mag™ 抗 GFP 標(biāo)簽納米抗體（來自羊駝 VHH，單域抗體）偶聯(lián)磁珠

反應(yīng)性
抓取在大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞或體外轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)中表達(dá)的轉(zhuǎn)染 GFP 融合蛋白。
所有表達(dá) GFP 融合蛋白的系統(tǒng)都是合適的。

測試應(yīng)用
免疫沉淀（IP）
共免疫沉淀（Co-IP），
染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）
RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RIP）
酶測定
質(zhì)譜法
親和純化
在IP中，25µL的珠懸浮液用于約500µL的粗總細(xì)胞裂解物溶液。
最佳稀釋度/濃度應(yīng)由最終用戶確定。

特性
免疫原
這種納米抗體是用帶有 GFP 蛋白的羊駝制成的。
形成
磁珠共軛抗 GFP 納米抗體，該產(chǎn)品在 10 mM PBS、pH 7.4 和作為防腐劑的 0.02% (w/v) 疊氮hua鈉中提供。
儲存說明
儲存于 4 °C。不要凍結(jié)

該抗體為納米抗體，來自aplaca，其優(yōu)點(diǎn)如下：

• 快速、可靠和高效的一步免疫沉淀

• 即用型、高穩(wěn)定性、高親和力

• 下游 WB 無重抗體鏈和輕抗體鏈干擾

• 在苛刻的洗滌條件下穩(wěn)定

• 適用于下游質(zhì)譜、CoIP、ChIP、RIP、蛋白質(zhì)純化等

• 適用于以下樣本：哺乳動物、植物、細(xì)菌、酵母、昆蟲等。

結(jié)構(gòu)圖

結(jié)合能力
~1mg GFP 蛋白/ml 珠懸浮液
珠子直徑
~ 40 微米

應(yīng)用

在下游 WB 和質(zhì)譜分析中不會干擾傳統(tǒng)抗體重鏈和輕鏈
一步免疫沉淀
高度特異性結(jié)合
低背景
高親和力
穩(wěn)定性高

哺乳動物細(xì)胞裂解物中 GFP 融合蛋白的免疫沉淀 (IP/CoIP) 方案

該方案旨在對 GFP 標(biāo)記的融合蛋白進(jìn)行免疫沉淀，以通過蛋白質(zhì)免疫印跡或活性測定進(jìn)行分析。

溶液和試劑

1X 細(xì)胞裂解緩沖液：50 mM Tris (pH 7.5)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA、1% Triton X-100。建議在使用前添加 1 mM PMSF。

1X 洗滌緩沖液：TBS（50 mM Tris HCl，150 mM NaCl，pH 7.5）

5X SDS 上樣緩沖液

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞裂解物

1. 要在非變性條件下收獲細(xì)胞，去除培養(yǎng)基并用冰冷的 PBS 沖洗細(xì)胞一次。去除 PBS 并向每個板（10 cm，106-107 個細(xì)胞）中加入 0.5 mL-1mL 1X 冰冷細(xì)胞裂解緩沖液（添加蛋白酶抑制劑混合物和 PMSF），并將板在冰上孵育 30-40 分鐘，4 °旋轉(zhuǎn)攝氏度。

2. 從平板上刮下裂解的細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到微量離心管中。繼續(xù)冰上。

3. 在冰上對樣品進(jìn)行超聲處理 3 次，每次 5 秒（可選步驟）。

4. 4°C、14,000 xg 微量離心 10 分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到新管中。如有必要，可將裂解物儲存在 –80°C 下。

注意：如果目的蛋白是核蛋白，請使用RIPA裂解液裂解細(xì)胞，并加入PIC、1mM PMSF、2.5mM Mgcl2和1mg/ml DNase I。

2. 平衡珠子

1. 顛倒產(chǎn)品管或輕輕上下吹打以重懸珠子。不要渦旋珠子。

2. 吸取 25 µL 珠漿到 EP 管（1.5 mL）中，然后加入 1 mL 冰冷的洗滌緩沖液。用手輕輕搖晃 1-2 分鐘。不要渦旋珠子。

3、磁選60秒。

4. 棄去上清，重復(fù)洗滌 3 次。

3. 免疫沉淀

1. 取 500 μL 細(xì)胞裂解液，加入 25 μL 抗體偶聯(lián)磁珠懸液，4°C 孵育 1-3 小時或 4°C 過夜。

4. 清洗蛋白質(zhì)-納米抗體-珠復(fù)合體

注意：如果研究了 Co-IP 相互作用的蛋白質(zhì)，請減少洗滌次數(shù)，并降低洗滌緩沖液的離子強(qiáng)度。

加入 1.0 mL 的 Wash Buffer 并懸浮珠子復(fù)合物，磁選，然后棄去上清液。重復(fù)上述步驟至少四次。

5. 下游分析的洗脫

GFP 融合蛋白的洗脫-根據(jù)蛋白質(zhì)特性或進(jìn)一步用途推薦兩種洗脫方法：

選項(xiàng) A：天然洗脫

在酸性條件下用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脫。這是一種快速有效的洗脫方法。用中和緩沖液（1 M Tris，pH 10.4）中和洗脫的蛋白質(zhì)可能有助于保持其活性。中和緩沖液需要預(yù)先放入收集管中。

注意：需提前做初步實(shí)驗(yàn)，確定中和甘氨酸（PH 2.5）需要多少中和緩沖液

選項(xiàng) B：SDS-PAGE 的變性洗脫

在凝膠電泳和免疫印跡的變性條件下用樣品上樣緩沖液洗脫。

A：用 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5) 洗脫 - 該過程應(yīng)在室溫下進(jìn)行。
注意：不要將珠子留在該緩沖液中超過 20 分鐘。

1. 向每個樣品和對照珠復(fù)合物中加入 50 µL 0.2 M 甘氨酸 (pH 2.5)。

2. 在 4°C 下輕輕搖動或在旋轉(zhuǎn)器上孵育樣品和對照 5-10 分鐘。

3. 將試管放入磁力分離器中以收集珠子。將上清液轉(zhuǎn)移到含有 25-35 μL 中和緩沖液的新管中。小心不要轉(zhuǎn)移任何珠子。

4. 重復(fù)步驟 1-3 以提高洗脫效率，將洗脫液集中在同一管中或通過不同管收集洗脫液。

6. 如需立即使用，請將洗脫液儲存在 2-8 °C。儲存在 –20 °C 以進(jìn)行長期儲存。

B：用 SDS-PAGE 上樣緩沖液洗脫

1. 用 30 µL 1X SDS 樣品上樣緩沖液重懸每個樣品（6 µL 5X SDS 樣品上樣緩沖液可以添加到 24 µL 細(xì)胞裂解緩沖液中）。渦流。

2. 在 95 – 100°C 下將樣品管和對照管煮沸 10 分鐘。

3. 將試管放入磁力分離器中以收集珠子。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中。樣品和對照已準(zhǔn)備好加載到 SDS-PAGE 上，并使用抗 GFP 或針對融合蛋白的特異性抗體進(jìn)行免疫印跡。

上海牧榮生物科技有限公司是一家專注于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域，以銷售為主的生物技術(shù)公司。銷售的產(chǎn)品涉及，細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備等。

Engibody Biotechnology，Inc被Engibody Biotechnology，Inc.收購。Engibody 是用于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的試劑產(chǎn)品的。我們?yōu)槊庖邔W(xué)，腫瘤學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)，干細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞凋亡提供抗體，抑制劑和試劑的全面創(chuàng)新的產(chǎn)品組合。Engibody 通常首先將關(guān)鍵試劑推向市場，然后開發(fā)了800多種用于抗體和抑制劑的產(chǎn)品。

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Engibody 已成長為所有實(shí)驗(yàn)室試劑（包括抑制劑，抗體和細(xì)胞因子）的可靠供應(yīng)商。 Engibody 近建造了一個全新的先進(jìn)設(shè)施，以適應(yīng)其不斷增長的產(chǎn)品線。

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