MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit

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MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒可以普遍結合任何生物素化的生物分子(例如抗體、蛋白質(zhì)、肽、DNA)。MagVigen鏈霉親和素-生物素-生物分子復合物可使用磁性架(目錄號A20006)與未結合的生物素-生物分子輕松分離。這提供了一種用磁性納米粒子標記生物分子的快速而簡潔的方法。純化的納米粒子-生物分子復合物可用于多種下游生物分離過程(例如蛋白質(zhì)純化、免疫沉淀、細胞分離或去除以及分子檢測。)

MagVigen鏈霉親和素理想地與小鼠抗體一起用于從獲自組織或器官的細胞群體混合物中分離細胞(例如CTCs、干細胞)。分離的細胞是活的，可以進一步培養(yǎng)或用于下游分子分析，如mRNA分離和RT-PCR。使用MagVigen納米顆粒進行細胞分離無需使用色譜柱，因此細胞不會因通過色譜柱基質(zhì)而受到機械應力的影響。磁性分離的細胞高度純化，并保持其活力，是下游應用的理想選擇。

mag vigen–鏈霉親和素用于細胞富集的優(yōu)勢

• 簡單快速地制備納米顆粒-初級小鼠抗體綴合物
• 簡單溫和的細胞分離
• 強而持久的熒光信號
• 一致的高質(zhì)量結果
• 高結合能力
• 高生物相容性
• 低非特異性結合

產(chǎn)品內(nèi)容

• cat # 21005 c:MagVigen-鏈霉親和素在含0.02% NaN3和0.02% BSA的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中提供。pH 7.4。每個小瓶包含1毫升的溶液，其顆粒濃度為2毫克/毫升，這足以結合10個

  9

  細胞。

納米粒子尺寸:使用動態(tài)光散射測量的200-500納米。
多分散指數(shù) < 0.2.

容量:50微克生物素抗體/毫升納米顆粒

Cat# K21005C還包括:

• 洗滌緩沖液
• 洗脫緩沖液

除磁鐵外的所有材料都應儲存在4°c下。

保質(zhì)期:6個月

草案

細胞富集

該協(xié)議提供了濃縮10的一般指南5 -106使用MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒的細胞。請根據(jù)具體應用調(diào)整試劑的量。

1. 使用前，輕輕渦旋或吸取小瓶中的MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒。




2. 等份20-50 μl納米粒子溶液用于富集實驗。

注意: 20-50 μl通常足以富集105 -106細胞。細胞捕獲效率可受多種因素影響，例如細胞群體中靶細胞的頻率、細胞表面表達的抗原/表位的密度以及抗體親和力。相應地調(diào)整納米顆粒的量。

3. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在試管側面1-2分鐘，將納米顆粒從溶液中分離出來，并小心去除上清液(磁鐵仍在側面)。




4. 向納米顆粒中加入1μg-2μg生物素偶聯(lián)的抗體(體積為100- 200 μl ),并在旋轉器上孵育30-60分鐘。

注意: 50 μl納米粒子可以結合約2μg抗體。

5. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結合的抗體。




6. 將納米顆粒-抗體綴合物重新懸浮于洗滌緩沖液(50 μl)中，并將其添加至細胞樣品，總體積為0.1-0.5 ml。




7. 在室溫下，將納米顆粒與細胞樣品在軌道振蕩器上孵育30分鐘。




8. 孵育后，使用磁鐵將納米顆粒(與細胞結合)從溶液中分離出來，并小心去除上清液。




9. 用500μl細胞培養(yǎng)基洗滌納米顆粒-細胞復合物兩次。




10. 分離的細胞可以重新懸浮在細胞培養(yǎng)基中用于下游應用。

注意: 洗脫緩沖液可用于從MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒中洗脫目標蛋白質(zhì)或細胞。

免疫沉淀

MagVigen納米顆粒可通過免疫沉淀分析鑒定新的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，其中MagVigen鏈霉親和素生物素-抗體復合物可用于從分析樣品(如細胞裂解物)中分離特定的目標蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復合物。免疫沉淀的蛋白質(zhì)可以通過電泳、蛋白質(zhì)染色和質(zhì)譜進一步分析。MagVigen納米顆粒比傳統(tǒng)微珠小得多。這一特征使得納米顆粒更容易接近抗原表位，并且對蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復合物的天然功能干擾更少。此外，MagVigen納米顆粒的表面經(jīng)過涂層處理，可減少與細胞蛋白質(zhì)和其他生物分子的非特異性相互作用。該特征允許更具體地“下拉"真實蛋白質(zhì)復合物靶。

納米粒子清洗

為了獲得納米顆粒的最佳結果，建議在添加到樣品之前清洗納米顆粒。

1. 渦旋MagVigen納米顆粒10-20秒。




2. 取50μl納米粒子溶液，加入到100μl 1X洗滌緩沖液中，渦旋混合。




3. 將磁鐵放在試管側面2-5分鐘，將納米顆粒從溶液中分離出來，并小心除去上清液(磁鐵仍在側面)。

注意: 在微量離心管的側面應該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物。

4. 清洗納米顆粒2次。

免疫沉淀

5. 向含有細胞裂解物的試管中加入2 μg生物素抗體(或按照公司方案推薦的量)。




6. 在冰上孵育一小時。




7. 向試管中加入50μl預洗的MagVigen納米顆粒。在4°c下旋轉2小時




8. 用磁鐵將納米顆粒從樣品溶液(細胞裂解物)中分離出來。去除上清液。




9. 用所用的50μl裂解緩沖液洗滌納米顆粒3次。




10. 最后一次清洗后，去除上清液，并向珠子中加入100μl洗脫緩沖液。




11. 渦旋并孵育5分鐘。




12. 從溶液中磁性分離納米粒子。收集上清液，同時避免干擾珠粒。目標蛋白質(zhì)存在于上清液中，準備進行分析。

外來體隔離

1. 使用前，輕輕渦旋或吸取小瓶中的MagVigen鏈霉親和素磁性納米顆粒。




2. 等份50 μl納米粒子溶液用于富集實驗。

注意: 50 μl通常足以富集1-10×105外來體。外來體捕獲效率可受多種因素影響，例如樣品中外來體的頻率、外來體表面表達的抗原/表位的密度以及抗體親和力。相應地調(diào)整納米顆粒的量。

3. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒兩次。將磁鐵放在試管側面1-2分鐘，將納米顆粒從溶液中分離出來，并小心去除上清液(磁鐵仍在側面)。




4. 向納米顆粒中加入500 ng生物素偶聯(lián)的抗體(體積為100-200 μl ),并在旋轉器上孵育30-60分鐘。

注意: 50 μl納米顆?？梢越Y合約200 ng的抗體。

5. 用500 μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-抗體綴合物兩次，以去除未結合的抗體。




6. 將納米顆粒-抗體綴合物重新懸浮于洗滌緩沖液(50 μl)中，并將其添加至細胞樣品，總體積為0.1-0.5 ml。




7. 在2°C±8°C的溫度下，將納米顆粒與預富集的外來體樣品在軌道振蕩器上孵育2小時或過夜




8. 孵育后，用磁鐵將納米顆粒(結合有外來體)從溶液中分離出來，小心除去上清液。




9. 用500μl洗滌緩沖液洗滌納米顆粒-外來體復合物。




10. 外來體結合的納米顆?，F(xiàn)在準備用于外來體裂解、凝膠電泳和蛋白質(zhì)分析。

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